中华人民共和国国家标准　　　　　　　　　　　　　
食品中着色剂的测定方法 GB 5009.35-85

Method for determination of artificial colour in foods
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本标准适用于各类食品中着色剂的测定。
1　原理
　　水溶性酸性染料在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法
或薄层色谱法进行分离后，与标准比较定性、定量。　
2　试剂
2.1　聚酰胺粉(尼龙6): 200目。　
2.2　硫酸:1:10。
2.3　甲醇-甲酸溶液: 6:4。
2.4　甲醇。
2.5 20%柠檬酸溶液。
2.6　10%钨酸钠溶液。
2.7 石油醚: 沸程60～90℃。
2.8　海砂: 先用1:10盐酸煮沸15min，用水洗至中性，再用5%氢氧化钠溶液煮沸15min，
用水洗至中性，再于105℃干燥，贮于具玻璃塞的瓶中，备用。
2.9　乙醇氨溶液: 取1ml氨水，加70%乙醇至100ml。
2.10　50%乙醇溶液。
2.11　硅胶G。　
2.12 pH6的水: 用20%柠檬酸调节至pH6。
2.13 盐酸: 1:10。　
2.14 5%氢氧化钠溶液。
2.15 碎瓷片: 处理方法同2.8。
2.16　展片剂
2.16.1 正丁醇-无水乙醇-1%氨水(6:2:3): 供纸色谱用。
2.16.2 正丁醇-吡啶-1%氨水(6:3:4): 供纸色谱用。
2.16.3　甲乙酮-丙酮-水(7:3:3): 供纸色谱用。
2.16.4 甲醇-乙二胺-氨水(10:3:2): 供薄层色谱用。
2.16.5 甲醇-氨水-乙醇(5:1:10): 供薄层色谱用。　
2.16.6　2.5%柠檬酸钠-氨水-乙醇(8:1:2): 供薄层色谱用。
2.17 色素标准溶液(以下商品作为标准以100%计)。
　　胭脂红: 纯度60%; 苋菜红: 纯度60%; 柠檬黄: 纯度60%; 靛蓝: 纯度40%; 日落黄: 
纯度60%; 亮蓝: 纯度60%。
　　精密称取上述色素各0.100g，用pH6的水溶解，移入100ml容量瓶中并稀释至刻度。此
溶液每毫升相当1mg商品色素。靛蓝溶液需在暗处保存。
2.18 色素标准使用液: 临用时吸取色素标准溶液各5.0ml,分别置于50ml容量瓶中,加pH6
的水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于0.1mg商品色素。
3　仪器
3.1　分光光度计。
3.2　微量注射器或血色素吸管。
3.3 展开槽, 25 × 6 × 4 cm。
3.4 层析缸。
3.5 滤纸: 中速滤纸, 纸色谱用。
3.6 薄层板: 5×20。
3.7 电吹风机。
3.8　水泵。
4　操作方法
4.1　样品处理
4.1.1　果味水、果子露、汽水: 吸取50.0ml样品于100ml烧杯中。汽水需加热驱除二氧化
碳。
4.1.2 配制酒: 吸取100.0ml样品于烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。
4.1.3 硬糖、蜜饯类、淀粉软糖: 称取5.0或10.0g粉碎的样品，加30ml水，温热溶解，
若样液pH值较高，用20%柠檬酸溶液调至pH4左右。
4.1.4　含蛋奶的制品
4.1.4.1　奶糖: 称取10.0g粉碎均匀的样品，加30ml乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩至
约20ml，立即用1:10硫酸调溶液至微酸性再加1.0ml1:10硫酸，加1ml10%钨酸钠溶液，使
蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。
4.1.4.2 蛋糕类:称取10.0g粉碎均匀的样品,加海沙少许,混匀,用热风吹干样品(用手摸
已干燥即可以)，加入30ml石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理三次，以
除去脂肪，吹干后研细，全部转入G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇-氨溶液提取色素，
直至色素全部提完，以下按4.1.4.1自“置水浴下浓缩至约20ml"起依法操作。
4.2　吸附分离
　将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0.5～1.0g聚酰胺粉充分搅拌，用20%柠檬酸溶
液调pH至4，使色素完全被吸附，加溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素
的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤(如用G3垂融漏斗过滤，可以用水泵慢慢
地抽滤)。用20%柠檬酸酸化至pH4的70℃水反复洗涤，每次20ml，边洗边搅拌，若含有天
然色素，再用甲醇-甲酸溶液洗涤1～3次，每次20ml，至洗液无色为止。再用70℃水多次
洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中必须充分搅拌。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部
色素，收集全部解吸液，于水浴上驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至50ml,用分光光
度法进行测定。如果为多种色素混合液，则进行纸色谱法或薄层色谱法分离后测定，即将
上述溶液置水浴上浓缩至约2ml后移入5ml容量瓶中，用50%乙醇洗涤容器，洗液并入容量
瓶中并稀释至刻度。
4.3　定性
4.3.1　纸色谱
　　取色谱用纸,在距底边2cm的起始线上分别点3～10μl样品溶液、1～2μl色素标准溶液,
挂于分别盛有2.16.1、2.16.2的展开剂的层析缸中，用上行法展开, 待溶剂前沿展至15cm
处，将滤纸取出于空气中晾干,与标准斑比较定性。
也可取0.5ml样液，在起始线上从左到右点线条状，纸的右边点色素标准溶液，依法
展开，晾干后先定性后供定量用。靛蓝在碱性条件下易褪色，可用2.16.3展开剂。
4.3.2　薄层色谱
4.3.2.1　薄层板的制备
　　称取1.6g聚酰胺粉、0.4g可溶性淀粉及2g硅胶G，置于合适的研钵中，加15ml水研匀
后，立即置涂布器中铺成厚度为0.3mm的板。在室温晾干后，于80℃干燥1h，置干燥器中
备用。
4.3.2.2　点样
　　离板底边2cm处将0.5ml样液从左到右点成与底边平行的条状，板的右边点2μl色素标
准溶液。
4.3.2.3　展开
　　苋菜红与胭脂红用2.16.4展开剂, 靛蓝与亮蓝用2.16.5展开剂，柠檬黄与其他色素用
2.16.6展开剂。取适量展开剂倒入展开槽中, 将薄层板放入展开, 待色素明显分开后取出
，晾干, 与标准斑比较,　如比移值相同即为同一色素。
4.4　定量
4.4.1　样品测定
　　将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次, 洗液移入10ml比色管中，并加水稀
释至刻度,　作比色测定用。
　　将薄层色谱的条状色斑包括有扩散的部分， 分别用刮刀刮下， 移入漏斗中， 用乙
醇－氨溶液解吸色素，少量反复多次至解吸液无色, 收集解吸液于蒸发皿中, 于水浴上挥
去氨, 移入10ml比色管中，加水至刻度，作比色用。
4.4.2　标准曲线制备
　　分别吸取0.0、0.50、1.0、2.0、3.0、4.0ml胭脂红、苋菜红、柠檬黄，日落黄色素
标准使用溶液，或0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml亮蓝、靛蓝色素标准使用溶液，分别置
于10ml比色管中，各加水稀释至刻度。
　　上述样品与标准管分别用1cm比色杯,以零管调节零点,于一定波长下(胭脂红510nm,苋
莱红520nm，柠檬黄430nm，日落黄482nm，亮蓝627nm，靛蓝620nm)，测定吸光度，分别绘
制标准曲线比较或与标准色列目测比较。
4.5　计算
          A × 1000
X = ──────────
      m × V2/V1 ×1000
　式中:X——样品中色素的含量，g/kg或g/l;
　　　 A——测定用样液中色素的含量，mg;
　　　 m——样品质量(体积)，g(ml)；
　　　 V1——样品解吸后总体积，ml; 
　　　 V2——样液点板(纸)体积，ml。

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附加说明:
　　本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监
督检验所归口。
　　本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
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中华人民共和国卫生部1985-05-16发布 1985-12-01实施